LyoDt® Cronobacter Dondurma Kurutulmuş Tozu için Gerçek Zamanlı PCR Deteksi Reagent

LyoDt® Cronobacter Dondurma Kurutulmuş Tozu Gerçek Zamanlı PCR Deteksi Reagent

1.Giriş

CronobacterYeni tanımlanmış bir bakteri cinsi.Enterobacter sakazakii. Cronobacterağır bir gıda kaynaklı patojen, esas olarak kirlenmiş bebek formülü ile bulaşıyor, yeni doğanların meningitine, sepsise ve nekrotizasyon enterokolite neden oluyor. Ölüm oranı % 80'e kadar ulaşabilir.

Bu ürün, tüylerin tespit edilmesi için donarak kurutulmuş gerçek zamanlı PCR rejantıdır.CronobacterÇok korunmuş olan ompA genini kullanıyor.CronobacterBu, şablon DNA hariç tüm gerekli bileşenleri içeren bir mastermix olup, kullanımı kolaylaştırmak için PCR tüplerinde tek test olarak önceden dağıtılır.Bu ürün nakliye ve depolama için soğuk zincir gerektirmez., bu da nakliye maliyetlerini önemli ölçüde azaltır ve rejanstı israf ve aerosol kirliliği nedeniyle olası kayıpları ortadan kaldırır.

2. SPECIFIKASYONLARI ve Tasarımı

3Depolama Ve raf ömrü

Oda sıcaklığında (5-30°C) saklayın. 12 aya kadar istikrarlıdır. Vakum ambalajı açıldıktan sonra, lütfen kullanılmayan ürünleri, sağlanan tekrar mühürlenebilir plastik torbaya kurutucularla birlikte saklayın.ve alüminyum folyo torbasında.

UYARI:

Reaktör peletesinin küçülmesi, tüpün içine sızan nemin bir göstergesidir ve reaktör nemlenmiştir.Normalden önemli ölçüde daha küçük granül boyutuna sahip herhangi bir rejanst kullanmadan önce atılmalı veya pozitif kontrolle test edilmelidir.Örnek testleri için.

4Ek Ekipmanlar ve Rejanlar Gerekli

1) Gerçek zamanlı PCR aracı

2) Pipetler ve ipuçları

3) Nükleazsız su

4) Nükleik asit ekstraksiyon kiti

5Uyumlu Gerçek Zamanlı PCR Sistemi

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. Kabul edilebilir numuneler

Gıda zenginleştirme çorbası, kusma, ishal örnekleri vb.

7. OPERASYON PROCEDURASI

1) Nükleik Asit Ekstraksiyonu

Uygun bir ekstraksiyon kitini kullanarak örneklerden DNA çıkarın.Bu nedenle,DNAYaklaşık 100μl elüsiyon tamponu ile elüte edilir.(TEya daNükleazsız H₂O) Son aşamadaçıkarma.Temizlenmiş nükleik asit hemen kullanılmalı veya -20°C' de saklanmalıdır.

2) Pozitif kontrol hazırlığı

Pozitif kontrol, rehidratasyondan önce en fazla 12 ay boyunca ortam sıcaklığında saklanabilir.₂O, 15-20 saniye boyunca düşük hızda girdaplanmış ve 15-20 saniye boyunca düşük hızda santrifüje edilmiş.

3) Gerçek Zamanlı PCR karışımı hazırlama

A) Vakum paketini açın ve rejanstı içeren 8 tüplü şeritleri çıkarın.Eğer sağlanan tüpler aletinizle uyumlu değilseRejanstürü cihazınızla uyumlu bir optik tüpün içine aktarın.

B) Tüpleri açın ve kapağı atın (gerçek zamanlı PCR makineleri için uygun değildir) ve reaksiyon karışımını buz üzerinde aşağıdaki gibi hazırlayın.

Adımçıkarma.Temizlenmiş nükleik asit hemen kullanılmalı veya -20°C' de saklanmalıdır.

2) Pozitif kontrol hazırlığı

Pozitif kontrol, rehidratasyondan önce en fazla 12 ay boyunca ortam sıcaklığında saklanabilir.₂O, 15-20 saniye boyunca düşük hızda girdaplanmış ve 15-20 saniye boyunca düşük hızda santrifüje edilmiş.

3) Gerçek Zamanlı PCR karışımı hazırlama

A) Vakum paketini açın ve rejanstı içeren 8 tüplü şeritleri çıkarın.Eğer sağlanan tüpler aletinizle uyumlu değilseRejanstürü cihazınızla uyumlu bir optik tüpün içine aktarın.

B) Tüpleri açın ve kapağı atın (gerçek zamanlı PCR makineleri için uygun değildir) ve reaksiyon karışımını buz üzerinde aşağıdaki gibi hazırlayın.

* Nükleazsız su negatif kontrol olarak kullanılabilir.

• PCR'yi gerçek zamanlı PCR için uygun olan kapaklar (çizgiler) kullanarak kapatın ((verilmedi).

D) Tüpleri düşük hızda 10 ~ 15 saniye boyunca döndürün ve 3000 rpm'de 20 saniye boyunca santrifuge edin ve gerçek zamanlı bir PCR cihazına yerleştirin.

2) RT-PCR Kurulumları

Reaksiyon hacmi 25μl olarak ayarlayın ve PCR amplifikasyon prosedürünü aşağıdaki gibi yapın. 60 °C'de FAM floresansı toplayın ve pasif referans olarak NONE seçin.

3) Sonuç Analizi ve Yorumu